marker电泳条带为什么会这样 marker电泳条带为什么会这样
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运行电泳时，很多人可能会羡慕别人的电泳带清晰好看，而自己的电泳带有时散乱，有时弯曲。
熟能生巧，只要掌握了正确的操作步骤，也能跑得轻松自如。
清洁玻璃板
蘸些洗涤剂，轻轻擦洗。
两面用自来水冲洗，用蒸馏水冲洗，放在篮子里晾干。
如果不继续使用，用无水乙醇擦拭，晾干后妥善收好。玻璃板用玻璃纸隔开。
梳子在使用前应该用水清洗，并用无水乙醇擦拭。
胶水填充和样品装载
1.玻璃板对齐后，放入夹具中夹紧。
然后垂直贴在架子上灌胶。
2.根据点胶套件的说明，选择合适的分离胶浓度，最后加入TEMED，然后摇匀填充胶。
配制凝胶时，应充分混合。另外要保证试剂的新鲜度，尤其是过硫酸铵。
倒胶时要把握好速度，避免产生气泡。
胶水加一层水，封液后会凝胶更快。
倒胶的时候可以启动的更快，胶面接近要求高度的时候可以慢下来。
在操作过程中，胶水必须沿着玻璃板向下流动，这样胶水中就不会有气泡。
用水密封要慢，否则打眼会使胶水变形。
未聚合的丙烯酰胺有神经毒性，操作时应戴手套保护。
将浓缩胶插入梳子时，确保没有气泡。
注意留出足够的空空间放置覆膜胶。
3.当水和胶水之间有折射线时，说明胶水已经凝固。
再等几分钟，感觉差不多的时候，就可以把上一层胶水的水倒出来，用吸水纸吸干。
聚合时间由AP和TEMED决定，一般为30 min左右。AP不新鲜，聚合会变慢。当空气温度低时，凝胶会慢慢凝结。必要时可适当增加AP和TEMED的用量，但一般不超过1 h..
如果聚合未进行超过1小时或更长时间，应检查制备操作是否有错误。
TEMED催化APS释放相关的化学基团，然后APS释放的基团催化Acr/Bis聚合，所以如果APS不新鲜，多加入TEMED是无效的，所以建议每周新鲜制备APS。
4.按照说明书准备好层压好的胶粘剂，加入TEMED填充胶粘剂后立即摇匀。
用浓缩胶填充剩余的空空间，然后将梳子插入浓缩胶中。
倒胶时，使胶水顺着玻璃板流下，避免胶水中有气泡。
插入时保持梳子水平。
因为胶水凝固时体积会收缩减少，从而使上料孔的上料量减少，所以最好在浓缩胶水凝固前，两边补胶，直到刚好掉下来。
浓缩胶凝固后，双手握住梳子的两边，轻轻垂直拉出。
5.利用叠层胶的聚合时间，取适量样品与1X SDS加载缓冲液混合，在95 ~ 100℃加热5 min。如果有沉淀，可以在稍低的温度下加热，如45 ~ 55℃加热1 h，达到变性的目的。
我通常将20微升装入聚合酶链反应管中，与加载缓冲液混合，在使用前用聚合酶链反应仪在95℃95℃加热5分钟。效果不错。
6.胶水制成后，与玻璃板一起安装在电泳槽上，加入电泳缓冲液后开始准备加载。
添加样品前，用5 ml注射器或取样器冲洗样品添加孔。
用微型取样器靠墙吸取样品，不吸气泡将样品吸出。
将取样器的针头插入取样孔中，慢慢加入样品(如果加入样品太快，样品会冲出取样孔，如果有气泡，样品可能会溢出。
添加下一个样品时，注射器应在外槽的电泳缓冲液中清洗三次，以避免交叉污染。
目前我们做的迷你胶上有10个装样孔，一般第一个孔加马克笔，其他9个孔加样品，或者头尾孔加马克笔，中间8个孔加样品。
样品添加前应进行离心，尤其是放置时间较长的样品。
应在不添加样品的情况下向孔中添加等量的样品缓冲液。
装载样品时，注意不要使样品溢出，污染相邻的取样孔。
也可以用10 ul的枪头，比用微型取样器快多了。使用枪头时，注意不要插入太深。玻璃板很容易打开，样品会落入胶水和玻璃板之间的空缝隙。
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